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匿名使用者 發問時間: 科學化學 · 2 0 年前

B-glucan的區別與定量

如題

要區別

B-1,3-glucan

B-1,4-glucan

B-1,6-glucan

除了使用NMR之外

還有沒有其他的方式阿 = = a..

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兩位大大真的很專業

2 個已更新項目:

真的很想給cancer 跟Yy 大大

各15點

3 個解答

評分
  • cancer
    Lv 5
    2 0 年前
    最佳解答

    酵素法: 比如說找beta-1,3-glucanase, 作用後,可被水解的,就是beta-1,3-glucan,配合其他酵素,就可在區別的結構

    化學法降解法: periodate oxidation,不被降解的是1,3-glucan; 再進一步使用Smith degradation, 降解產物的比例與型式, 可知為何種鍵結, 至於beta或alpha-form,還是得靠旋光度計

    Methylation: 經過衍生後水解, 可知道多醣鍵結形式, 光學結構(alpha or beta)還是得靠旋光度計

    免疫專一性親合法: 如使用ELASA, antigen等, 另外,Anilin Blue對beta-1,3-glucan有專一性

    各有優缺點, 有的偵測極限高, 有的專一性高, 有的步驟簡單, 不過NMR和免疫法, 是非破壞性的, 也就是樣品可回收, 在樣品量少時, 可優先考慮

    2005-07-14 18:48:41 補充:

    這個......

    專一性的酵素是有的,實驗室裡就有beta-(1,6)的,不過現在該公司已停產了就是, 這些酵素都很貴,也很不容易找,有些人甚至自己做

    免疫法的話,市面上可能沒有,想要得自己做

    NMR的話,只要東西夠純,濃度夠,C-13的圖譜,會看的非常清楚(我做過),尤其配合大分子專用的特高磁場NMR,H-1的圖譜也有辦法看到

    2005-07-14 18:54:39 補充:

    在補充一件事, 甲基化我是不曉得有沒有人在賣標準品, 不過我沒看過有人用, 因為沒必要, 尤其是對一個未知的樣品, 鍵結排列組合,不知道需要多少種標準品, 所以一般都用質譜儀

    2005-07-14 23:13:54 補充:

    ...沒要跟你吵的意思

    5.7.甲基化我"列於我回答的方法裡"了,這的確是一常用的方法,其產物稱為partial methyl aditol acetate,也就是甲基化,水解完,還得再乙醯化,這東西不同鍵結的"產物就不同"(與MS無關),peak經由管柱分開,每一peak由MS打出來的片段不一樣,除分子量的資訊,還可得到結構的資訊,這樣ok嗎?至於那本書我有,我看很多遍了

    6.本來就應該考慮能用的儀器,沒錯

    3.其實實驗裡也有beta-1,3的,而且還有在賣,beta-1,6目前尚未尋獲有新的廠商在賣(實驗室只剩一點),beta-1,4我沒去找,這樣可以嗎?

    2005-07-14 23:14:51 補充:

    4.抱歉,我沒說我定beta-1,6,我定的是beta-1,4,用的是傳說中的600-NMR,借用清華貴儀的,你知道若C-4有接跟沒接東西,化學位移會差很多吧,C-3同樣,只要圖譜清楚,單醣組成已知,很簡單看,至於圖譜要清楚,看過你的回答清單了,你對NMR還蠻熟悉的,你應該知道,現在手上沒資料,只有beta-(1,4)-Gal的,C-4在78.560,C-3在73.820,應該不會攪在一起吧

    2005-07-14 23:17:31 補充:

    2.我沒說過好找...對吧,不過不代表沒有,Sigma可是"一大堆東西"都沒有的,因為我沒找過每一家,所以我不敢說有,也不敢說沒有,難找是真的

    1.我看到了阿,所以我提供了很多方法阿,不過就算是同種方法,也有不同的應用法,這要看個人的試驗怎麼設計,還有基本上我想答案會是C...,不過假設本來就不是事實,得因應實驗結果而改變策略

    歡迎來信討論(個人資料裡)

  • 1 0 年前

    我可以請問在座各位高手嗎?...

    2006-03-08 18:48:12 補充:

    請問,cm-glucan b-1,3的功效??

    以上是我發問的問題,您直接複製問題查詢就可以看到,

    目前有一人回答,但是答案我不是很滿意...

    我覺得你們對此成分有研究,可否請您幫我解答??

  • Yy
    Lv 7
    2 0 年前

    Cancer 大大的回答都是高見,可借的是(1) 具專一性只水解 beta-1,3 or beta-1,4 or beta-1,6 的酵素是買不到的。大 部分市售的 glucosidase 都能水解 1,3- , 1,4-, and 1,6-glycoside bond。 (2) 免疫法也是如此,仍沒有市售產品可分辨 beta-1,3 or beta-1,4 or beta-1,6-glucan。 (3) 一般NMR ,尤其是只做1D H1-NMR,不能分辨beta-1,3 or beta-1,4 or beta-1,6-glucan,因H-2, H-3, H-4,H-6訊號都在一起附近,混成一堆。

    要分辨或可用化學法,先甲基化然後酸水解,再分析水解產物的單糖與市售甲基化標準品比較,可以 TLC, GC, or HPLC。

    2005-07-14 21:45:30 補充:

    Cancer 大大的確是高手呀

    1. 敬請注意題目,問題是:

    要區別beta-1,3-glucan,

    beta-1,4-glucan,

    beta-1,6-glucan

    也是說有幾個可能-

    a. 有3個樣品,已知其可能結構如上述,單純的1,3-,1,4-,or ,16-linkage,但不知誰是誰,別無其他

    b. 有單一樣品,但不知是1,3-,1,4-,or ,1,6-linkage,

    c. 通常beta-1,3-glucan,

    beta-1,4-glucan,會有側鏈在6號連結

    2. 閣下提過的酵素及ELISA kit 己找過 Sigma 才說難得到

    2005-07-14 21:46:30 補充:

    3. 只有 1,6-glucanase 無補於事,還有1,3-,1,4-如何區分

    4. 相信 Cancer 大大的確的以 C-13 定1,6-glucan。1,6-linkage 不難,poly- or oligo-glucopyranose 分子中只有6號位置是 CH2 其他都是CH(1) 在C-13較易分辨,了不起再做一個DEPT。

    2005-07-14 21:47:01 補充:

    但是敢問大大 2、3、4號位置的碳氫 C13或氫譜的 chemical shift 在那。如何區分 1,3-及1,4-linkage?就是用 500MHz (閣下所說的做 polymer 的吧,傳說中研院內有600 MHz 甚致800MHz的) 其1D氫譜中 2、3、4號位置也是難分難解。需用 2DCOSY, 甚致HMQC, HMBC,簡單的碳氫譜是否可成敬請告之。此外,題目是"除了使用NMR之外, 還有沒有其他的方式"

    2005-07-14 21:47:16 補充:

    5. MS 是很好得知分子量的方法,請問 1,3-; 1,4-; 1,6-linkage 的 framentation 有何不同又有甚麼 daughter ion 判別其linkage

    6. 在台灣校外的業界,只知兩家有自己的NMR, MS。請不用提貴儀中心了,用過的人都知了

    2005-07-14 21:47:25 補充:

    7.甲基化單糖的標準品的確難買,但仍是可有的,況且本題目的多醣單純,不像如細菌膜上的醣蛋白般複雜。此法已用久了,不同的糖甲基衍生物在 paper chromatography, TLC, GLC相關位置也多有報導。例如Carbohydrate analysis : a practical approach / edited by M.F. Chaplin, J.F. Kennedy. IRL Press

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