何謂蛋白質表現的誘導

何謂蛋白質表現的誘導?

它的原理與有啥注意事項及目前的用運??

2 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    您設定的問題範圍好大,假如設定從DNA的觀點來看蛋白質表現的誘導這件事.與探討過程中會產生什麼該注意的事項與用意...

    主要是藉由基本的 DNA 剪接方法,建構能夠在大腸桿菌中大量表現 GUS 之表現質體 。 將已經次選殖於質體 pBluescript SK (-) 之 gusA (原稱 uidA) 基因片段,以適當的限制脢作用後,選殖至表現載體 pQE31 上,以利用其上之 T5 promoter 進行表現。 gusA 基因原本即存在於大部分的大腸桿菌中,屬於 " 誘 導 性 " 的基因 (inducible gene),當培養基中存在 GUS 能夠作用的基質 (glucuronides) 時,即可誘導大腸桿菌中的 gus operon 進行表現 GUS, glucuronide-specific permease, GusC 等 " 蛋 白 質 "。 由於 GUS 相當穩定,活性檢測也十分簡易,因此 gusA 基因常被應用為報導基因 (reporter gene),探討目標基因的表現及其調控機制。 利用 GUS 相當穩定的優點,作為質體建構、基因表現產物分析及純化的材料。 基因表現質體的建構該注意的事項與用意如下:

     

    01 質體 DNA 的小量分離:

    自 E. coli 菌株中分離純化 pBlueGus (pBluescript 上帶有 gusA DNA 片段) 以及 pQE31。

    02 質體 DNA 之檢定分析:

    純化的兩種質體以限制脢進行切割後進行電泳檢定。

    03 DNA 片段的分離:

    將經過 BamHI 與 HindIII 切割的 pBlueGus 及 pQE31,進行電泳分離,並將 gusA DNA 片段及 pQE31 自膠體中溶離出。

    04 DNA 之定量:

    將溶離出之 gus DNA 及 pQE31 進行定量分析。 

    05 接合反應 (ligation):

    將 gusA DNA 片段及經 BamHI 與 HindIII 切割之 pQE31 以適當比例混合並加入 T4 DNA ligase 進行接合反應。

    06 質體對大腸桿菌的轉形 (transformation):

    將接合反應液對 E. coli JM109 進行轉形,以得到帶有質體之菌株。

    07 重組質體的檢定:

    以 colony hybridization, histochemical detection, 質體檢定, Southern 轉印等方法,挑選可以表現 GUS 的轉形株。

    http://www.dls.ym.edu.tw/lesson/gen.htm

    http://www.polaris.com.tw/3good/rdroom/report/9008...

    http://www.nics.org.tw/magazine/11/06/11-6-7.htm

    http://binfo.ym.edu.tw/bch/na/na_geometry.htm

    參考資料: 網路
  • 6 年前

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