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? 發問時間: 科學生物學 · 2 0 年前

請問膜蛋白要如何純化呢?感謝各位大大喔

請問在膜上的蛋白質,在純化上有什麼特別要注意的地方呢?

經過表現的細菌在離心之後接下來該怎麼做,才能去純化得到膜上的蛋白質?

各位大大可以教一下小弟嗎 感謝喔^^

2 個解答

評分
  • 2 0 年前
    最佳解答

    膜上的蛋白質基本上比較難取得

    你的蛋白因該是經由送入载體基因然後由細菌表達的吧?

    那種上面通常會有接his(用his tag) 或是用GST的方式去存化

    如果是表達膜蛋白的話,打破細菌離心的話,細胞膜蛋白會沉澱到下面

    還需要另一些比較麻煩的步驟(所以我不會這樣做)

    其實在破菌離心離時仍會有一些膜蛋白,會離開膜而析出,留在上清液(或許量不是那麼多)

    所以我建議你細菌的量養大一點,這樣上清液仍會有你要的蛋白

    但方法卻簡單多了

    參考資料: 我做過
  • Hsu ¦
    Lv 6
    2 0 年前

    先把細菌打破,用離心收集膜的部分(可溶性的蛋白質留在上層液中)。再用適當的detergent溶解膜,使膜蛋白釋出。然後用分離蛋白質的方法(如HPLC、電泳等)來純化之。

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