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克靡 發問時間: 科學生物學 · 1 0 年前

Internal ribosome entry site?

Internal ribosome entry site (ires)

什麼是ires?

有類似mRNA 5\' cap的結構?

那將他放入vector中有什麼應用的地方呢?

謝謝

1 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    內部的核醣體進入位(internal ribosome entry site, IRES)

    真核與原核生物基因之轉譯起始(translation initiation)機制不同。一般真核生物基因訊息RNA 為單順反子信使 RNA (monocistronic mRNA),轉譯時需要最 5’端的 Cap 結構,不能由mRNA 內部起始,因此一般真核 mRNA 只能轉譯最接近 5’端的一個開放譯讀區。

    但有些病毒或少數種類的細胞 mRNA 具有 IRES 序列(10),使得核醣體能在細胞蛋白質幫助下,直接與IRES 結合,開始轉錄位於 mRNA 內部之開放譯讀區。

    IRES 在基因表現主要用途是形成可轉譯雙基因的 mRNA (bicistronic mRNA),有下列的應用:

    (1) 建立穩定表現株。為建立穩定表現株,實驗者需要同時表現選擇指標及外源基因,最好的選擇是由同一質體帶有兩種基因。但有時轉錄同一質體上的兩個基因可能會產生干擾,形成雖然表現出選擇基因,卻不一定表現外源基因。實驗者也可以兩個質體分別帶有外源及選擇指標基因進行共同轉染,但如前面提到共同轉染不一定是百分之百。為克服此一缺點,研究者可以將外源基因置於表現出 mRNA的 5’ 端,如一般真核基因般進行轉譯;選擇基因則置於 IRES 下游,由內部開始轉譯,達成同一個載體經由同一個啟動子表現雙蛋白質的效果。

    (2) 共同表現一個複合蛋白質的兩個蛋白質鏈。在基因表現時實驗者若需要表現由兩個蛋白質鏈所組成之複合蛋白質,往往需要同時將兩個基因同時表現,以求得最高之複合蛋白質表現。早期這些基因可能分別由不同載體表現,且常需要以穩定表現株進行共同表現,但由於兩個基因插入數目及環境不同,因此很難協調二者間的表現量。經由雙轉譯區的的設計,實驗者較易達到基因共同表現的目的。目前可選用的 IRES 序列多數來自病毒,但每一病毒 IRES 序列在不同細胞中促進內部轉譯起始的能力不完全相同,因此使用者需選擇較合適的序列。

    參考資料: 組織培養及基因表現 – 動物系統
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