start 發問時間: 科學生物學 · 1 0 年前

請問ELISA和Western Blot兩者的差別?

可否請大家告訴我ELISA和西方墨漬法兩者的不同處在哪阿?

paper上有提到...但一直無法明確的弄清楚兩者的差別

原理 應用方面哪裡不同?

感謝大家~

2 個解答

評分
  • 陳皓
    Lv 6
    1 0 年前
    最佳解答

    ELISA與Western blotting都是應用免疫分析(Immunoassay)定量蛋白質的技術,其作法如下:

    1. ELISA ( Enzyme-Linked ImmunoSorbent Asay)

    (1) 先將first Ab固著於測定盤的凹槽 (microtiter well)上或塑膠珠子 (plastic beads)上;

    (2) 將樣品 (如血清、體液)加入測定盤內 ;

    (此時樣品中欲測的蛋白質便與first Ab作用而被固定,免於清洗時流失)

    (3) 加入標記酵素的second Ab,可與固定的蛋白質上另一個抗原決定位作用;

    (4) 加入標記酵素的受質後,引發的呈色反應再以ELISA儀器比色之,便能定量蛋白質的多寡。

    [心得]:蛋白質的立體結構必須夠大,存有兩個不同的抗原決定位 (不可交叉反應)

    而且立體空間上互不影響其與單株抗體間的結合,

    故又稱三明治免疫分析法,兩個抗體將欲測抗原夾在中間。

    圖片參考:http://www.e-biolearning.com/bbs/attachments/photo...

    2. 2. Western blotting

    (1)欲分析的檢體 (血清、萃取物)先進行SDS-PAGE的電泳分離;

    (2) 轉移至Nylon membrane的濾紙上 (就如同Southern blooting的轉移技術,一般稱為electroblotting transfer);

    (3) 將濾紙浸泡於含有first Ab的buffer中 (以便將一級抗體固定於濾紙上含有該蛋白質的位置處);

    [註]:一級抗體一般是實驗室自行將粗萃取物注射老鼠或兔子所獲得,

    分離該動物的血清,其中便含有與欲測蛋白質作用的一級抗體 (多株抗體)。

    (4) 加入標記的second Ab,可與固定的一級抗體作用。

    [註]:二級抗體多由廠商購得,Anti-rabbit or Anti-mouse IgG 的抗體 (單株抗體)

    且多具有特定的標記物 (如酵素或放射線元素以便偵測而定量)。

    圖片參考:http://www.e-biolearning.com/bbs/attachments/photo...

    [比較]:

    1. ELISA是在一個microtiter plate上完成所有的步驟,

    一般多用於臨床上 (樣品多可於96-well中同時分析多個檢體);

    Western blotting則需要進行電泳、轉移等步驟,一般多在實驗室分析用。

    2. ELISA操作簡單、快速,且需要 ELISA專用比色儀等;

    Western blotting較麻煩、耗時,且多與其他實驗的設備通用如電泳槽,放射顯影設備等。

    3. ELISA的兩種抗體都與欲測的蛋白質作用;

    Western blotting僅一級抗體與蛋白質作用,其二級抗體則與一級抗體作用。

    Dr. 陳皓

    參考資料: www.e-biolearning.com (E-流生化教育網版權所有)
  • u ming
    Lv 4
    1 0 年前

    原理可能很像 有抗體抗原雜合

    但用法 及操作都不同

    ELISA可以用來定量(量的多寡)

    西方墨漬法可以用來定性(確定目標是否存在),好點可以拿去定序(確認組成)

    參考資料: 以前常蹲著看跑電泳...
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