世裕 發問時間: 科學其他:科學 · 1 0 年前

DNA probe

DNA probe 一般長度是多少??

才能有偵測能力~~~

已更新項目:

可以依照不同的實驗目的

給予長度建議嗎??

2 個已更新項目:

西方墨點法

北方墨點法

南方墨點法

各個所需的DNA 探針長度是多少??

EX:幾個核甘酸?

3 個已更新項目:

沒有西方墨點法= =||

打太順....

3 個解答

評分
  • amino
    Lv 5
    1 0 年前
    最佳解答

    版大您好:

    圖片參考:http://tw.yimg.com/i/tw/blog/rte/smiley_1.gif

    其實許多的分子生物技術皆需要製作探針(DNA probe),特別是有雜交(hybridization)過程的實驗,當我們想要偵側某一個基因時,就會先將該基因片段選殖出來,再將其大量增殖與標定,即可成為探針。

    探針的標定方式隨著多種類的標定物而有差異,一般常見的標定物有放射性與非放射性兩類,因許多生技公司已有專利產品,故後者的種類較多。

    (1)放射性標定:一般是以32P作為標記,由於核苷酸中有磷酸根,可藉由核苷酸原料中的32P標記,來合成DNA分子中。其偵測訊號強,且可直接以X-光片曝光來得知結果。

    (2)非放射性標定:如以biotin或DIG等小分子作為標記在核苷酸的原料上,再進一步合成於DNA分子中。此除具有安全性高外,亦具有敏感及省時之優點。

    另外,再以DNA的標定方式來區分成以下(A)與(B)兩種方法,其原理如下圖所示:

    圖片參考:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bookres.fcgi/hmg...

    圖片參考來源:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bookres.fcgi/hmg...

    (A)DNA端點標記:常以klenow fill-in或核酸激酶來將帶有標定的核苷酸原料分別加到DNA的3'端或轉移至DNA 3'端的最後一個核苷酸上,可不用事先將DNA變性,此探針的長度可以電泳來確認。

    (B)全部DNA標定:以選殖出的DNA片段為模板,利用6~7鹼基長度的寡核苷酸逢機引子與含有標定物的聚合材料,藉由PCR的方式來合成具有標定物的DNA探針。此DNA探針的長度主要是由您所選殖出來基因片段的大小來決定的。

    一般來說,DNA probe的長度,大至幾個kb而小也有數個bp,只要DNA probe與 target DNA具有互補的序列,且probe有標定成功的話,於進行雜合反應時,即有偵測能力,但若要進行專一性較高的實驗時,則要用較長的probe來偵測。

    以上資料提供給您參考看看!希望對您有所助益,若還有不足或錯誤之處,再惠請知識專家們不吝補充與指正!歡迎來到我的無名參觀指教囉!amino的網誌首頁

    圖片參考:http://tw.yimg.com/i/tw/blog/rte/smiley_39.gif

    2007-05-07 20:41:55 補充:

    RNA的北方墨點法偵測如同DNA的南方墨點法,只是目的與分析材料上的差異;而西方墨點法則是蛋白質經電泳分離後,經轉漬到硝化纖維膜上,再利用一級與二級抗體反應後,藉由酵素將受質轉變成可偵測的產物訊號,其並無使用到DNA探針哦!

    參考資料: DNA生物技術+網路圖片+自己整理
  • 1 0 年前

    連結到http://www.sinica.edu.tw/~mdarray/infor/infor0.htm

    你會氣死= =

    2007-05-06 16:40:49 補充:

    你要問的 應該是探針的長度吧?

    探針 (probe),是生物基因研究的工具,簡單來說是基因晶片上最重要的好幫手。

    由於DNA 是由兩股核酸長鏈捲繞成的雙螺旋,此兩股核酸之間的互補性極強,但經高溫加熱後可把兩股核酸解開,回復室溫後又可找到互補的配對而恢復原狀。

    用這樣的方法,若有一小段核酸,其鹼基序列與目標的 DNA 序列互補,則可用這小段核酸當作探針,與經過加熱解開的目標 DNA 混合,兩者便發生互補而黏合在一起,是為"雜合反應 hybridization";若探針分子上帶有放射性或其他螢光標誌,則目標核酸就會連上標誌而被我們觀察到,可以量測多種基因表現。

    DNA晶片的原理是將數千或數萬點(spot),單股的DNA又稱探針(probe),主要有兩種來源:核甘酸oligonucleotide和已經存在於基因庫中的互補核甘酸cDNA。以高密度的方點製在拇指般大的晶片上,其材料可能為玻璃片或是尼龍薄膜。方法之一的寡核甘酸晶片主要是由Affymetrix(位於加州的Santa Clara)這家生技公司所製造。他們主要是利用DNA的A、T、C、G四種鹼基,用類似築摩天高樓的方式,一個個不同的組合,築上約20~25個(層)寡核甘酸。方法二的互補核甘酸的晶片主要是利用從病人的檢體或是其他的生物體抽取出的已知的互補核甘酸,然後將這些互補核甘酸點在晶片上。不同的生技公司用不同的方法將這些互補核甘酸點上去,各有其優缺點。

    不過我沒辦法給建議,抱歉。測試不同,要求便不同。

    參考資料: 網路資源
  • 1 0 年前
還有問題?馬上發問,尋求解答。