小敏 發問時間: 科學其他:科學 · 1 0 年前

急~~請問有關western blotting

我們實驗室是使用半乾式transfer的儀器~~儀器是owl牌ㄉ~~

但偶卻遇到無法將SDS-page上的marker transfer在 NC paper上?不知原因出在哪??

因是照著以前學姊留下來ㄉ資料去做~~

transfer buffer ㄉ配方是25mM Tris 192mM glycine 20%methanol

膠片和濾紙擺放的順序也沒錯~~

但唯一比較奇怪ㄉ是利用~~250mA transfer 1小時

偶照著做並沒有transfer成功~~>"<

試了粉多方法卻不知問題出在哪??

看有些文獻上顯示必須在4度C下 transfer 24小時~~

卻不知問題出在哪????希望有經驗的大大可以幫偶解決~~~

因指導教授在催ㄌ~~有點十萬火急阿!!拜託各位ㄌ!!!

2 個解答

評分
  • 匿名使用者
    1 0 年前
    最佳解答

    理論上 250mA 1小時 是可以的啦~ 

    4C 24小時 不如用液體Transfer

    會不會你的 Transfer 故障 沒有過電 

    或是 你的 Buffer 不夠純 造成短路 

    檢查一下 Transfer 有沒有過電 可以不可以用~ 

    再 重新配過新的 Buffer

    然後 做一個 Postive Cnotrol 以確定確實Transfer

  • 1 0 年前

    這個問題相當簡單,打電話給當初賣您們儀器的廠商,相信他們有這個義務,回答您相關的問題,一般的儀器商都很樂意的!!

    參考資料: 自已
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