Western Blot的原理

請問各位

Western Blot的原理是什麼?

這個方法又是應用在什麼地方?

1 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    蛋白質分析

    都先將目標物跑過電泳膠後再轉漬到另一片膜上

    之後利用探針(抗體標定)

    最後拍照(放射線用感光法)或直接用偵測器上電腦分析

    最早被研究出來,原理是利用特殊的抗體辨認特定蛋白質,進而用螢光呈色在底片上的方法,現在在醫院中常被應用在檢測疾病上,缺點是有點慢(最快也要一天)

    Western blotting

    (1)欲分析的檢體 (血清、萃取物)先進行SDS-PAGE的電泳分離;

    (2) 轉移至Nylon membrane的濾紙上 (就如同Southern blooting的轉移技術,一般稱為electroblotting transfer);

    (3) 將濾紙浸泡於含有first Ab的buffer中 (以便將一級抗體固定於濾紙上含有該蛋白質的位置處);

    [註]:一級抗體一般是實驗室自行將粗萃取物注射老鼠或兔子所獲得,分離該動物的血清,其中便含有與欲測蛋白質作用的一級抗體 (多株抗體)。

    (4) 加入標記的second Ab,可與固定的一級抗體作用。

    [註]:二級抗體多由廠商購得,Anti-rabbit or Anti-mouse IgG 的抗體 (單株抗體)且多具有特定的標記物 (如酵素或放射線元素以便偵測而定量)。

    參考資料: 知識
還有問題?馬上發問,尋求解答。