小帥蛋 發問時間: 科學化學 · 1 0 年前

DNA膠體電泳的問題

這是我的報告的問題 想請會的人多多給予答案

答案請要有保握才回答 因為這個老師挺嚴的

所以答案請完整...

1.Loading dye的組成為何?為何在電泳前需先加入Loading dye?

2.列出鑄膠過程中所需之成分.比率.及影響因子。

3 個解答

評分
  • gene
    Lv 5
    1 0 年前
    最佳解答

    1.DNA loading dye的成分主要是bromophenol blue和glycerol...

    一般常用的6X DNA loading dye的配方...:

    0.25% bromophenol blue,

    30% glycerol

    bromophenol blue 是藍色染料,用於將sample染色,

    標定sample的loading的位置...

    還有在run gel時,gel中會出現兩條藍色的band...

    一條深藍一條淺藍...

    DNA 的band一般會出現在這兩條band之間....

    當然有一些size較小的DNA會跑在這兩條藍色band的前面...

    我們可以在跑電泳時,觀察這兩條band的位置...

    大概估計DNA跑到哪個位置了...

    防止DNA跳海(跑超過gel的意思)...

    glycerol 是甘油,和sample混合,使DNA sample比重增加...

    使DNA sample在loadiing到well中時,可以安安穩穩的沉到gel的well中

    而不會容易溢出或飄散到別的well和buffer中...

    2.一般DNA的膠體電泳可用agarose gel也可以用polyacrylamide gel,

    不過polyacrylamide gel,在製備上較麻煩,

    而且未凝膠的acrylamide具有神經毒性,

    polyacrylamide gel,通常是用來分析小分子量的DNA...

    一般DNA的膠體電泳用agarose gel就可以了...

    agarose gel的製備方式,就是用不同比例agarose 粉末,

    和電泳的buffer加熱溶解...

    凝固製成的0.5%-3%的agarose gel

    agarose gel電泳的buffer有兩種:TAE和TBE...

    TAE buffer: Tris-Acetate-EDTA buffer

    一般50XTAE buffer的配方:

    242 g Tris base

    57.1 ml Acetic acid

    100 ml 0.5M EDTA

    加水至1公升,並調整至pH:8.5

    使用前再用水稀釋至1X...

    TBE buffer:Tris-Borate-EDTA buffer

    一般10XTBE buffer的配方:

    108 g Tris base

    55 g Boric acid

    9.3 g EDTA

    加水至1公升,pH8.3

    使用前再用水稀釋至1X...

    3.影響電泳的因素

    a.gel濃度的高低,濃度越高,gel的孔徑越小,

    適合分析越小分子量的DNA

    b.DNA的結構,環形的DNA會有超螺旋結構,

    超螺旋結構會使DNA跑的較快

    C.buffer中的鹽份濃度,成分和pH值 ...

    在高鹽濃度下,對buffer的pH值的緩衝能力較好,

    但因為在固定電壓下會使電流傳導增強,

    容易造成buffer過熱的情況,有時溫度過高會使gel融化,

    在低鹽的濃度下,電流傳導不易,DNA較不易移動...

    使用TAE buffer時,acetate會被氧化成碳酸鹽,

    造成陽極pH值上升,陰極pH值下降,使緩衝能力慢慢消失,

    所以TAE不能長時間反覆使用,必須常更換buffer...

    TBE的緩衝能力較好,可以長時間反覆使用...

    還有一種buffer,TPE(Tris-phosphate) buffer...

    這是用於polyacrylamide gel,,

    但是因為電泳時會產生磷酸鹽沉澱,也不適合長時間反覆使用

    2007-11-26 11:35:36 補充:

    謝謝Extag(龍鴨) 大大的修正,補充一下...

    因為yahoo不知為什麼不讓我補充在補充內容中,只好到這做補充

    在實驗室裡常用的loading dye中,除了bromophenol blue外,

    還會再添加Xylene Cyanol,

    在電泳時,bromophenol blue跑的比Xylene Cyanol快

    所以在gel上會出現兩條藍色的band...深藍在前和淺藍後

    深藍是bromophenol blue,淺藍是Xylene Cyanol.

    loading dye的目的不是用來染DNA的,只是讓sample solution帶有顏色

    用於追蹤sample

    參考資料: 我的小腦袋
  • 匿名使用者
    1 0 年前

    小小修正一下:

    bromophenol blue 是藍色染料,用於將sample染色,

    bromophenol blue 並不會將DNA sample染色, DNA 還是要用 EtBr 染色

    bromophenol blue 只有一條 band

  • 1 0 年前

    sample指的是什麼

    要怎麼去配它

    包含體積幾比幾可以說清楚嗎??

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