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匿名使用者 發問時間: 健康疾病與處置癌症 · 1 0 年前

流式細胞儀分析

1.請問:若我做「健康狀態的正常細胞」飢餓壓力的模式(缺血清),細胞週期G1、G2、S期與無飢餓壓力的正常細胞相比,應該有怎樣的減少或增加的情形才有意義?(單染PI看Cell Cycle)

2.請問:late apoptosis的細胞才能讓PI染劑染到嗎?(是因為凋亡晚期細胞膜才能接受染劑?) 這是指凋亡晚期細胞膜破了嗎?若是的話,與necrosis又有何差別呢?還是PI可以染無論是早期或晚期的apoptosis?

2 個解答

評分
  • Peace
    Lv 4
    1 0 年前
    最佳解答

    哈囉~~

    在第一個問題方面:

    因為我之前有做過Cell cycle方面的實驗~

    我印象中~當細胞在缺血清的medium狀況下~

    這時候的cell應該是會arrest G0/G1 phase~

    通常會做這種實驗,最主要是要測定cell cycle arrest~~

    意思就是說~讓cell全部在一樣的起跑點~~

    比如說~我想要知道~某一個藥物是否會造成cancer cell /cell cycle arrest~

    我可以一開始先將全部的cancer cell 處理沒有血清的medium~

    先讓cancer cell 全部停留在同一個時期(印象中約12~18hrs吧)~

    之後~我們再將medium換成有加血清的~並且處理藥物~~

    依照不同實驗設計~再收集cell~上flow~

    如果藥物會造成cell cycle arrest~則會明顯看到某phase peak會變高~

    但是記得還是要跟control比喔~~

    至於第二個問題~

    應該並不是late apoptosis的細胞才能讓PI染劑染到~

    像我們以前實驗室的做法~我們都會先以絕對酒精固定細胞膜~在利用PI上flow~就是將細胞膜打洞~讓PI可以進入核內~

    其實PI好像無法真確判斷apoptosis or nerosis~

    大多數都會以PI+annexin V~比較可以確定~

    其實如果你要確定cell apoptosis~

    應該不只用PI來判斷~

    你可能要再經由抽DNA ladder,western blotting,real-time PCR等~~

    來觀察相關的apoptosi protein, RNA表現量~~

    p.s寫的有點複雜~~在加上畢業一段時間嚕~~可能有些地方不是很正確~~但是希望對你有幫助~

    參考資料: 自己
  • Wade
    Lv 5
    1 0 年前

    1.應該在G2/M期的peak會有增加的現象(表示拘留)!

    2.PI不會透過細胞膜 結合至DNA,只有壞死細胞因為破裂才會染上

    所以要染凋亡細胞 你可以用TUNEL去標記凋亡 而壞死用PI

    早期的細胞凋亡 需要用annexin V 和PI 雙染分別去看凋亡和壞死細胞

    晚期的細胞凋亡 可以用TUNEL 和PI去看凋亡和壞死細胞

    參考資料: 自己
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