2 個解答
- 1 0 年前最佳解答
Blood中主要細胞有RBC及WBC，但RBC正常是沒有細胞核，所以沒有DNA，因此從血液中抽DNA要從WBC著手。
WBC在血液中的濃度約5000-10000個/uL，所以必須先將WBC進行分離。
1. 以EDTA或heparin或CDA為抗凝固劑的採血管採血，以避免血液凝固。
2. 採血後立即與採血管內之抗凝固劑混何均勻。
3. 以1500rpm(半徑約20公分之懸吊式離心機)離心20分鐘後，小心取出採血管。
4. 注意血球(下層，紅色)與上清液(上層，透明淡黃色)中間還有一層白色的，那一層就含有許多WBC，所以那一層就叫做Buffy coat。
5. 將buffy coat以抽DNA的方式進行，即可得到高濃度的DNA。
至於所謂的ficol，應該說是ficoll paque，那是一種solution(可買到或自行配製)。
正常人從靜脈採血後，其WBC共有neutrophil、eosinophil、basophil、lymphocyte及monocyte等五種細胞型態，其中前3種為PMN(多型核白血球，因其細胞核會分葉，有時一個PMN看起來就有2-3個細胞核，因而有此稱謂)，後2種屬於單核白血球(細胞核不會分葉，看起來就只有一個圓圓的細胞核)。
如同上位朋友所說的，ficoll paque 該溶液的密度為1.077，而PMN的密度較重，單核白血球較輕，所以若要將WBC再進行純化，可用此solution得到分離PNM的效果。
因此，若你要抽的DNA是WBC中的PMN或是單核白血球，那你就須用此溶液將所需的WBC種類分離，才能抽DNA。步驟請參考http://homepage.ntu.edu.tw/~ibs/N502/93WangshuiHua...
若你只是要抽Genomic DNA，其實分出buffy coat就行了，方便、省錢、快速、純度高，非常好用。
祝你實驗順利
- VBCLv 71 0 年前
欲從血液中取得RNA、DNA、protein
建議使用TRI reagent BD試劑，可直接用全血操作，不需先行分離白血球。今年(2008)MRC發表新一代核酸、蛋白質萃取試劑TRI reagent RT系列；可分離出無DNA干擾的RNA，並有更高的回收率。
TR-118 TRI reagent BD
RB-211 TRI Reagent RT Blood
如需該試劑進一步資料請e-mail
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ficoll (有兩個L) 是 聚蔗糖 可用梯度離心的方式分離血球。用這方式分離白血球有人俗稱為blood ficoll，但blood ficoll不是WBC喔。
以下節錄自：
成功大學微生物及免疫學研究所 課程講義
血球細胞的分離
血液中含紅血球，血小板及白血球，可用離心方法先取得白血球，它的比重
介於紅血球和血小板間。白血球又可分為多形核白血球(polymorphonuclear
cells, PMN)及單核白血球(mononuclear cells)，可利用Ficoll isopaque的
密度階梯(density gradient)離心法來分開，Ficoll isopaque的密度
(density)為1.077，在一試管中，下層裝Ficoll isopaque，上層含白血球或
全血的水溶液，在離心之後，多形核白血球因較重( >1.077)會沈至底部，
單核白血球的密度接近1.077，因此會停留在中層，藉此可分開多形核白血球
和單核白血球。另外單核白血球的單核血球(monocyte)對塑膠培養皿有黏性
(adherence )，可透過黏著的方式移開單核血球，只剩下淋巴球(lymphocytes)。