小雨 發問時間: 科學生物學 · 1 0 年前

請問如何分離blood中的DNA

想要從blood中拿到DNA , RNA ,protein

請給我詳細protocol

另外ficol是啥

是WBC嗎

2 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    Blood中主要細胞有RBC及WBC,但RBC正常是沒有細胞核,所以沒有DNA,因此從血液中抽DNA要從WBC著手。

    WBC在血液中的濃度約5000-10000個/uL,所以必須先將WBC進行分離。

    1. 以EDTA或heparin或CDA為抗凝固劑的採血管採血,以避免血液凝固。

    2. 採血後立即與採血管內之抗凝固劑混何均勻。

    3. 以1500rpm(半徑約20公分之懸吊式離心機)離心20分鐘後,小心取出採血管。

    4. 注意血球(下層,紅色)與上清液(上層,透明淡黃色)中間還有一層白色的,那一層就含有許多WBC,所以那一層就叫做Buffy coat。

    5. 將buffy coat以抽DNA的方式進行,即可得到高濃度的DNA。

    至於所謂的ficol,應該說是ficoll paque,那是一種solution(可買到或自行配製)。

    正常人從靜脈採血後,其WBC共有neutrophil、eosinophil、basophil、lymphocyte及monocyte等五種細胞型態,其中前3種為PMN(多型核白血球,因其細胞核會分葉,有時一個PMN看起來就有2-3個細胞核,因而有此稱謂),後2種屬於單核白血球(細胞核不會分葉,看起來就只有一個圓圓的細胞核)。

    如同上位朋友所說的,ficoll paque 該溶液的密度為1.077,而PMN的密度較重,單核白血球較輕,所以若要將WBC再進行純化,可用此solution得到分離PNM的效果。

    因此,若你要抽的DNA是WBC中的PMN或是單核白血球,那你就須用此溶液將所需的WBC種類分離,才能抽DNA。步驟請參考http://homepage.ntu.edu.tw/~ibs/N502/93WangshuiHua...

    若你只是要抽Genomic DNA,其實分出buffy coat就行了,方便、省錢、快速、純度高,非常好用。

    祝你實驗順利

  • VBC
    Lv 7
    1 0 年前

    欲從血液中取得RNA、DNA、protein

    建議使用TRI reagent BD試劑,可直接用全血操作,不需先行分離白血球。今年(2008)MRC發表新一代核酸、蛋白質萃取試劑TRI reagent RT系列;可分離出無DNA干擾的RNA,並有更高的回收率。

    TR-118 TRI reagent BD

    RB-211 TRI Reagent RT Blood

    如需該試劑進一步資料請e-mail

    =======

    ficoll (有兩個L) 是 聚蔗糖 可用梯度離心的方式分離血球。用這方式分離白血球有人俗稱為blood ficoll,但blood ficoll不是WBC喔。

    以下節錄自:

    成功大學微生物及免疫學研究所 課程講義

    血球細胞的分離

    血液中含紅血球,血小板及白血球,可用離心方法先取得白血球,它的比重

    介於紅血球和血小板間。白血球又可分為多形核白血球(polymorphonuclear

    cells, PMN)及單核白血球(mononuclear cells),可利用Ficoll isopaque的

    密度階梯(density gradient)離心法來分開,Ficoll isopaque的密度

    (density)為1.077,在一試管中,下層裝Ficoll isopaque,上層含白血球或

    全血的水溶液,在離心之後,多形核白血球因較重( >1.077)會沈至底部,

    單核白血球的密度接近1.077,因此會停留在中層,藉此可分開多形核白血球

    和單核白血球。另外單核白血球的單核血球(monocyte)對塑膠培養皿有黏性

    (adherence ),可透過黏著的方式移開單核血球,只剩下淋巴球(lymphocytes)。

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