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專業護理師 發問時間: 社會與文化語言 · 1 0 年前

生物化學實驗十四之二的問題

Agarose Gel Electrophoresis

材料與試劑:

1.Mupid II Electrophoresis Apparatus with power supply.

2.Loading dye: 0.25% bromophenol blue ;40%(w/v)sucrose in DDW

3. Autoclaved 50 X TAE buffer:242g Tris base;57.1 ml glacial acetic acid;100ml 0.5M EDTA(pH8.0);make volume with DDW to 1L

4.Ethedium bromide(EtBr)stock solution:500ug/ml

5.DNA markers

6.Sterile 1.5-ml eppendorf tubes

7.UV transilluminator box or Image system

步驟:

1.Prepare 1.2%agarose gel by adding acorrect amount of powered agarose to a measured quantity of 1 X TAE buffer in the glass container.(1.2%agarose gel is suitable for most plasmid DNA electrophoresis.The amount of 1 X TAE buffer added should not be more than 50%volume of the glass container. )

2.Heat the mixture on hot plate or in a microwave oven until the agarose powder dissolves completely.

3.Swirl the mixture and let it cool to abount 60度C before pouring.

4.Set up the casting tray with apporopriare comb.

5.Swirl the agarose solution gently and thoroughly,then pour the warm agarose solution into casting tray.The gel should be between 3 mm and 5 mm thick.

6.After the gel is completely solidifed,remove the comb carefully and lay the gel with gel tray into the electrophoresis tank.

7.Add 1 X TAE buffer enough to cover the gel surface.

8.Mix each DNA samples and the DNA markers with 1 drop of loading dye and load the mixtures into each well slowly and carefully.

9.Put the lid of the gel tank on and attach the electrical cables correctly so that the DNA samples will migrate from cathode(-) toward the anode(+)

1 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    洋菜膠電泳

    材料與試劑:

    1. Mupid II電泳裝置與電源供應器

    2. 追蹤染劑:0.25%的溴酚藍(bromophenol blue)及40%(w/v)的蔗糖,溶解於無菌去離子水。

    3. 滅菌過的50 X TAE緩衝溶液:242公克Tris base、57.1毫升冰醋酸、100毫升0.5M EDTA溶液(pH8.0),加入無菌去離子水,使其體積變成1公升。

    4. 溴化乙錠(Ethidium bromide,EtBr)儲存溶液:500微克/毫升

    5. DNA標記

    6. 滅菌過的1.5毫升eppendorf離心管

    7. 紫外線燈箱或攝影系統

    步驟:

    1. 製備1.2%的洋菜膠膠體時,將正確重量的粉末狀洋菜膠加入裝有測過體積之1X TAE緩衝溶液的玻璃容器。(1.2%的洋菜膠膠體,適用於大多數質體DNA的電泳分析,使用的1X TAE緩衝溶液量不應超過玻璃容器體積的一半。)

    2. 在加熱板上或微波爐內加熱混合物,直到洋菜膠粉末完全溶解。

    3. 攪拌混合物,倒出前讓它冷卻至約攝氏60度。

    4. 使用適當的齒梳(comb)組合膠體製作台(casting tray)。

    5. 和緩但徹底地攪拌洋菜膠溶液,然後將仍有餘溫的洋菜膠溶液倒入膠體製作台。膠體厚度應該介於3公釐至5公釐之間。

    6. 等膠體完全凝固後,小心地取下齒梳,然後以膠體製作台將膠體放入電泳槽。

    7. 加入足以蓋過膠體表面的1X TAE緩衝溶液。

    8. 每件DNA樣本與DNA標記均加入一滴追蹤染劑並混合均勻,然後緩慢並小心地將此混合物注入樣本孔(well)。

    9. 將電泳槽的蓋子蓋上,然後正確接上導線,如此DNA樣本便能從陰極(-)往陽極(+)移動。

    以下內容或許發問者不愛聽

    除了特別加中英對照的地方

    其他應該都是可以自己查出來的

    下次何不自己試試看!

    我能理解念護理的志不在此

    但是這邊偷了點懶

    難保另一邊不是

    我很擔心哪一天被看不懂醫囑的護士照顧到

    更怕我剛好曾幫她翻譯、偷懶

    到時就真是我的報應了。。。

    加油!

    參考資料: 我是醫檢師、專業翻譯
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