多拉A夢 發問時間: 科學化學 · 1 0 年前

抗體protein A/G問題---急

我知道protein A/G他是蛋白,但是他取決於老鼠,和兔子而來的嗎?

我的實驗是做action二抗是anti-muose HRP,為什麼是用muose呢??

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    先說明 protein A/G:

    Protein A 是源自於 Staphylococcus的一種蛋白質,而 Protein G 怎源自於 Streptococcus。以上兩種物種都是微生物。現在一般利用基因工程的方式將這些蛋白質在 E.coli 中表現並純化。不管是 Protein A 或 Protein G 都是一種能與 IgG 結合的蛋白質。適合用在純化單株或多株抗體上。市面上有些 one-step western blot kit 也有使用 Protein A/G 來替代二抗,可以省去一個步驟。選擇使用 Protein A/G 時需注意欲純化的抗體來源物種,Protein A 比較便宜,但是對於山羊 goat, 大鼠 rat, 綿羊 sheep, 的親和性較差,需選用較貴的 Protein G。

    另外,關於你的實驗:

    因為你沒有詳細說明你的實驗,僅知道你的二抗是使用 anti-mouse HRP, 從這邊來解說與推測你的二抗完整應該是 (Goat) anti-mouse IgG conjugated HRP。其中 Goat 也可以是 sheep , rabbit 或其他動物都可以,不會影響實驗。

    進行 western blot 時,二抗的選擇與一抗的『來源』有關係,一抗的『來源』是 小鼠mouse,那二抗就必須使用 anti-mouse IgG antibody。所以你的一抗應該是 mouse anti-(x antigen) antibody,其中 x antigen 是你實驗的目標物。你的二抗就是(Goat) anti-mouse IgG conjugated HRP 。

    最後附帶說明,二抗上 conjugated HRP or AP 則與你最後用來呈色或冷光的試劑要搭配。

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