急需ELISA原理考試用

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如提  急需ELISA原理  考試用

Wade · Accepted Answer

ANS:

圖片參考：http://www.wretch.cc/album/show.php?i=way711223&b=5&f=1116002920&p=1

酵素免疫分析法（Enzyme-linked immunoassay，簡稱ELISA）利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；由於結合於固體承載物(一般為塑膠孔盤)上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計其鍵結機制後，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與鍵結機制的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（sandwich）、間接法（indirect）、以及競爭法（Competitive）三種為主，以下為各種方法之介紹(http://zh.wikipedia.org/wiki/%E9%85%B5%E7%B4%A0%E5%85%8D%E7%96%AB%E5%88%86%E6%9E%90%E6%B3%95)。

圖片參考：http://f7.wretch.yimg.com/way711223/5/1116002919.jpg

2008-12-26 11:59:17 補充：
間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：

1. 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原
   2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結
   3. 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結
   4. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量帶測抗原的含量。

kin · Answer

間接ELISA原理：
利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，來顯示特定蛋白質是否存在。

間接ELISA流程：
先將已知抗原固著在well底部
-->加入sample(待測抗體)
-->再加入帶有酵素的二抗
-->最後加入substrate偵測訊號
-->呈色量與待測抗體量成正比

DBT95

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