用EcoR1&BamH1限制酶來切λDNA的生化實驗
1.標準λDNA經過EcoR1&BamH1切出來會有幾個band? 大小各為何?
2.用兩個enzyme去切，數目個為何?大小各為何?
3.從這些限制酶切的數目怎麼知道他是環型還是線型
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- 1 0 年前最佳解答
有關Restriction Enzyme〈限制酶、剪制酶〉的敘述：
限制酶，屬於核酸內切酵素之一種，其特點細經由認識特定DNA序列，而切斷DNA。限制酶主要可分為三類，第一、三類限制酶切斷DNA的位置與認識位置不同，且每次切割點不一致，不亦由DNA序列預測其切斷的位置，而第二類限制酶其切斷DNA地點就位在所認識的DNA序列之內，且切割點固定。另外，第二類限制酶只會切割DNA，不項第一、三類限制酶還具有修飾DNA的功能，而且只要有鎂離子就可反應，不需要在另外加入ATP。因此第二類限制酶被廣泛應用於基因工程中。
目前被發現的第二類限制酶以操過1200種，認識的DNA序列超過200種，而市面上所販售的第二類限制酶也已超過120種。大部分限制酶認識的DNA序列為4或6個核甘酸序列，也有認識8個核甘酸序列。若依四種鹼基隨機任意排列於DNA來計算限制酶切割DNA片斷的大小，認識4個核甘酸序列的限制酶約256個核甘酸切一次，而認識6個核甘酸序列則約4096個核甘酸切一次，而認識8個序列則約65536個核甘酸切一次，因此我們可以依實驗上得需求，利用不同限制酶，切出大小適合的DNA片斷。
１、限制酶可同時減切兩條DNA糖─磷酸骨架〈共價鍵〉。
２、限制酶首於細菌中發現，而細菌本身DNA有抗性，加上甲基以修飾其辨識位置。
３、限制酶剪切DNA後，可形成鈍端及黏接端DNA片段。
G↓A－A－T－T－C
C－T－T－A－A↑G
黏接端
C－C－C↓G－G－G
G－G－G↑C－C－C
鈍端
４、限制酶辨識鹼基位置通常呈現迴文形式。
經限制酶切割後之DNA呈黏接端的形式：
b面和b面可互補性的相接〈共價鍵〉
a面和a面則需要連接酶作化學性結合
經限制酶切割後之DNA呈鈍端的形式：
a面和a面則需要連接酶作化學性結合
限制酶的作用機制：
限制酶的作用機制，只管切不管接，切割後DNA的接合需要黏接脢或是彼此間的共價鍵來完成。且DNA的作用位置，一定切在有某種共同記號的地方，該處含氮鹽基通常呈現迴文排列，因沒有共同記號的片段，黏接脢無法作用使兩片斷相接。
限制酶在遺傳學上的應用：
１、繪製染色體上的基因地圖
２、分析多核苷酸順序
３、基因之分離
４、研究真核細胞DNA之構造
５、重建並複製DNA分子即基因工程中重組DNA的製備
限制酶在生物學的意義：
１、細胞中有限制酶，則可以剷除不必要或有害的外來DNA。
２、限制酶之研究將可協助預防或治療畸形，遺傳疾病或癌症。
分子遺傳學的研究已進展到如何揭開基因真面目的時刻，基因是一條分子量很大的DNA，為了分析它的化學一級構造，以及研究它的功能，一定要先把它切成有規律的小段，利用電泳的方式將其分離之後，才能分別研究它們的特性。展望未來，基因工程在限制酶的發現及研究下，將可望研究出把健康的基因輸入真核細胞的方法，以其能完成基因治療的夢想。
