清場 發問時間: 科學生物學 · 1 0 年前

pUC8載體的實際應用

pUC8載體的實際應用以及特性!

如提!

請舉實際例子或是該如何應用(應用的層面)

不一定要已經商業化的,可以是推論中或是理論上的例子!

2 個解答

評分
  • 1 0 年前
    最佳解答

    首先,你知道載體(plasmid)是什麼意思嗎? 如果不清楚,要記得查一下書喔。

    至於你的問題:

    特性:

    pUC8 plasmid在實驗是中是常常使用的plasmid之一,上面有[抗ampicillin]的基因,也有[不同的Cloning sites],這些cloning sites可以讓你放入不同的基因。 重要的是,cloning site是存在於一段lacZ的基因之中,lacZ是早期用來做藍白實驗以確認基因是否有正確的放入cloning site。

    如果基因有正確的放入cloning site,那lacZ就會失去功能,當你做藍白實驗時,擁有這個plasmid的大腸桿菌(E. coli)就仍會保留白色。 擁有不正確的plasmid(也就是基因沒有成功的放入plasmid)的大腸桿菌則會變成藍色。

    應用層面:

    將你想要放入載體的基因與載體先用相同的脢(例如 BamHI)切開,然後再黏合這兩段DNA,然後再放入大腸桿菌,首先用ampicillin篩選擁有這個載體的大腸桿菌,然後再做藍白實驗來尋找擁有正確基因與載體的大腸桿菌。

    換句話說,這就是Cloning。

    2009-12-01 12:27:36 補充:

    不知道答案請不要誤導別人啊,貼那麼大一塊,卻與版主的的問題沒有任何關係,這樣不太好喔。

    參考資料: 自己,PhD in Genetics.
  • Luke
    Lv 4
    1 0 年前

    在下有找到一篇文章

    請您參考

    http://health.163.com/06/0823/15/2P7IU3MS00181S6B....

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    在梅毒螺旋體人工培養尚未獲得成功的情況下,基因克隆(即DNA重組)技術的出現為該病原的研究開闢了一條新的途徑。應用基因工程技術目前已製備出多種重組梅毒螺旋體抗原,這些抗原的製備對梅毒發病機理的探討、疫苗的研製、以及血清學診斷試驗的建立與應用具有重要意義,為梅毒的預防和控制提供了更加有效的手段。

    一、概況

    梅毒是一種臨床表現極為複雜,幾乎可累及全身各器官的性病。儘管本世紀40代年發現了治療梅毒的理想藥物棗青黴素,但目前該病在全球仍然是一項重要的公共衛生問題。目前尚未解決梅毒的病原體棗梅毒螺旋體的人工培養問題,從而阻礙了對TP致病機理探討、疫苗研製、以及梅毒血清學診斷技術開發等方面的深入研究。80年代初,隨著分子生物學技術的發展,特別是基因工程(DNA重組)技術的出現使梅毒螺旋體的研究進入一個新的階段,目前,TP的全部基因組DNA序列已經被解析。通過重組TPDNA的克隆以及在大腸桿菌中的表達,製備出多種重組TP抗原,為梅毒的研究提供了一條新的途徑。現就近10年來有關重組T抗原的研究現況進行復習。

    二、重組TP抗原的特性及製備

    目前已重組的TP抗原有近20多種,如TpN15、TpN17、TpN19、TpN29~35(TpD)、TpN44.5(TmPA)、TpN47、TpN35(TmpC)等[3]。現將其中部分有應用前景的重組TP抗原分述如下:

    (一)TP15kD抗原[4]:15kD蛋白是一種脂蛋白,首先由Hensel等1985年分離鑒定,它在TP膜蛋白中的含量相對較少,但在免疫印跡試驗中與人梅毒血清間顯示了超強的反應性,同時對實驗梅毒兔的淋巴細胞有很強的增生反應,表明15kD蛋白不僅具有較強的體液免疫原性,而且有較強的細胞免疫原性,但Centurion-Lara等實驗表明,此蛋白對TP感染沒有任何免疫保護性。重組15kD抗原基因由Norgard等用特異的單克隆抗體從TP基因庫中篩選得到。其最新報導的表達質粒pMALc2,該質粒在DNA插入位點的上游含有麥芽糖結合蛋白基因,使表達的融合蛋白易於分離和提純。

    (二)4D抗原:4D抗原是分子量分19kD的一種TP外膜蛋白,Radolf等[6]研究發現無論是自然狀態還是重組4D蛋白都由二巰鍵交叉相聯成寡聚結構,且耐蛋白酶,表明4D抗原可能在TP外膜保持完整結構中起著非常重要的作用。重組TP4D抗原首先由Feniger等在EoliRRI大腸桿菌中表達和分離提純[7]。Borenstein等用肌注和靜脈注射的方法探討了重組TP4D抗原對實驗性梅青的影響,顯示以4D抗原免疫動物後能夠改變實驗梅毒的病程,表明4D抗原免疫實驗動物後,可對感染梅毒產生部分保護的作用。提示重組TP抗原是製備疫苗的又一可能徑。

    (三)TP24

    kD抗原:此重組蛋白是以質粒pUC8 為載體在大腸桿菌中表達的一種分泌蛋白,具有很強的免疫原性,其編碼TP24kD抗原的DNA序列僅存在於致病性的TP基因中,而非致病性TP中不存在此DNA序列,提示TP24kD抗原與TP的致病性相關,但與TP致病性的關係有待進一步研究。Hsu等人的實驗發現,重現24kD的表達可以改變大腸桿菌的生長形態,出現與一般大腸桿菌不一樣的扁平粗糙的菌落和絲狀樣生長,表明24KD抗原與TP的生長特性相關。

    (四)TmPA和TmPB:TmP

    A是一個分子量為42kD的TP膜蛋白。Schouls[等構建了能在大腸桿菌K-12中大量表達該重組蛋白的質粒載體pPLc245。Ijsselmuiden等[10]用間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法探討了重組TmPA抗原在血清學診斷中的意義,通過對148例未治療和167例已治療的梅毒血清以及190例非梅毒血清進行了檢測,其敏感性分別為:

    一期梅毒76%、二期梅毒100%、早期穩性梅毒98%,在治療後1年以內的梅毒患者中,其抗TmPA的滴度明顯下降,這表明TmPA不僅在梅毒血清診斷中有意義,而且可望用於梅毒治療效果的監測。TmPB基因位於TmPA基因下游[9]。Schouls等人的實驗表明,抗TmPB抗體渡度隨著梅毒患者的治療呈下降趨勢,因而可望用於梅毒治療的監測。但單獨用TmpB抗原不適宜作血清學診斷,因為梅毒患者血清的很大一部分對TmpB不起反應。Wicher等用重組TP抗原對豚鼠進行免疫,結果發現,重組TP抗原中只有TmPB可以改變梅毒的病程,提示重組TmPB抗原在疫苗製備中可能有一定的意義。

    2009-11-27 22:37:15 補充:

    (五)TP47kD抗原:該蛋白為TP整合性膜蛋白抗原,1986年Norgard等在大腸桿菌中首先克隆及表達了重組47kD抗原。多中心研究發現,此蛋白有很強的免疫原性,在TP中含量非常豐富,且為致病菌特有的蛋白。Chamberlain等採用含有依賴T7RNA多聚酶的表達載體,建立了高效表達重組47kD的系統,並對此重組抗原與自TP中分離得到的自然47kD蛋白進行了生物學分析與比較,結果表明這兩種來源的47kD抗原其生物學特性相同,均為含蛋白脂

    2009-11-27 22:37:20 補充:

    質,其疏水性可能與致病性有關。為了探討疏水性結構與抗原性的關係,Weigel等[14]表達了非醯化的親水性重組47kD抗原,通過免疫印跡試驗對116例不同期的梅毒血清進行檢測,表明親水性重組47kD抗原的抗原性保持不變,說明醯化結構與抗原性無關。

    除了上述蛋白抗原外尚有多種具有較強抗原性的TP重組抗原,如Tromp2(28kD),TmPC(35kD)及34kD抗原等。這些重組抗原的生物學及免疫學特性等有待進一步探討。

    參考資料: Google,网易健康
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