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tweety 發問時間: 科學植物學 · 10 年前

yeast two-hybrid

最近看paper看到一個實驗:yeast two-hybrid assay

搜尋過很多答案,大致上的原理我都了解,

但是在此實驗,有一個部分是 bate-galactosidase activity assay,

我不太清楚當此酵素活性高代表的是兩個protein有interaction還是沒有?

請有做過此實驗的人幫幫忙?!

1 個解答

評分
  • 菲菲
    Lv 4
    10 年前
    最佳解答

    Yeast - two hybrid system 為實驗protein-protein 是否有

    interaction 之法,想必你早已從網路上的搜尋得之此點,在此也不再贅述!!

    -------------------------------------------------------------------------------- 一般來說,我們做實驗會以基因重組的方式做出 fusion 蛋白,才能進一步進行Y2H實驗, 首先你必須先知道很多的基因活化蛋白會含兩個domain :

    1. DNA-Binding domain : 負責與DNA結合,不具活化能力

    2. DNA-Activating domain : 負責活化基因,不具結合能力

    因此兩個domain 必須要在一起才能活化你想呈現之基因

    ------------------------------------------------------------------------ 例如 :

    若我想知道我手上X 蛋白 與Y 蛋白有沒有交互作用 ,那我就會先以基因重組的方式,

    將 X 的基因與乳糖操作組活化蛋白的DNA-Binding domain 做結合,其經轉錄轉譯後,蛋白即為 : X-B

    再另外將 Y 之基因與乳糖操作組活化蛋白的DNA-Activating domain做結合,其經轉錄轉譯後,蛋白即為 :Y-A

    可想而知;

    若X蛋白與Y 蛋白有交互作用,在X與Y會面時,勢必也會帶領B與A的接觸,得以藉B之結合能力,和A之活化能力,活化乳糖操作組,做出 lac Z gene ,也就是bate-galactosidase

    -----------------------------------------------------------------------

    圖片參考:http://imgcld.yimg.com/8/n/AD02497097/o/1010121502...

    ------------------------------------------------------因此,見此bate-galactosidase 活性高 ,

    自然意謂 lac Z 基因被活化,

    也就代表你原始的蛋白X與Y 有交互作用,

    才能帶領A與B之會面,進而活化基因!!

    -------------------------------------------------------

    ( 我均以顏色表示請仔細對照 )

    < 圖為親手繪製,不盡理想請見諒,也請尊重智慧財產權 >

    2010-12-15 19:10:33 補充:

    X-Gel 原本是藍色的,但是當被bate-galactosidase分解完會變成白色!!

    因此,變成白色的clone即為有表現基因,有interaction!!

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